離心機(jī)的重要性可從實(shí)驗(yàn)中參考

接下來(lái)介紹一種采用本法所提染色體DNA，可直接應(yīng)用于常規(guī)的分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)，包括PCR、限制性內(nèi)切酶的切割，以及基因組文庫(kù)的構(gòu)建。其中，有個(gè)關(guān)鍵性實(shí)驗(yàn)設(shè)備——離心機(jī),少了它可不行。

  1、 取1ml過(guò)夜培養(yǎng)菌液于8000g，離心機(jī)離心2min。去除培養(yǎng)基后，用400ul STE緩沖液（100mM NaCl，10mM Tris/HCl，1mM EDTA，pH8.0）重懸菌體，按相同條件離心清洗菌體兩次。

  2、 收集的菌體用200ul TE緩沖液（10mM Tris/HCl，1mM EDTA，pH8.0）懸起后加約50mg 直徑425-600um 規(guī)格的玻璃珠，再加入100ul Tirs飽和苯酚。

  3、 上述混合液在漩渦振蕩器上振蕩（細(xì)菌，振蕩60s；酵母，振蕩120s-200s），隨后于4℃，13000g，離心5min。

  4、 吸取上層水相（約160ul）轉(zhuǎn)移至一個(gè)新的離心管中，加TE緩沖液補(bǔ)至200ul，再加入100ul氯仿混勻后，于4℃，13000g，離心5min。重復(fù)此步兩到三次。

  5、 轉(zhuǎn)移上層水相（約160ul）至一個(gè)新的離心管中，補(bǔ)加40ul TE和5ul RNase（10mg/ml），37℃消化10min。

  6、 加入100ul 氯仿混勻于4℃，13000g，離心機(jī)離心5min。

  7、 轉(zhuǎn)移上層水相（約150ul）至一個(gè)新的離心管中。